膠體金（colloidal gold），又稱金溶膠（gold solution），是指分散相粒子直徑在l—150nm之間的金溶膠，屬于多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色。膠體金可以作為標記物用于免疫組織化學，近10多年來膠體金標記已經(jīng)發(fā)展為一項重要的免疫標記技術。膠體金免疫分析在藥物檢測、生物醫(yī)學等許多領域的研究已經(jīng)得到發(fā)展，并越來越受到相關研究領域的重視。

膠體金的應用:

１、膠體金在電鏡水平的應用。膠體金應用電鏡水平的研究最早，發(fā)展最快，應用最廣泛。其最大優(yōu)點是可以通過應用不同大小的顆粒或結(jié)合酶標進行雙重或多重標記。直徑為3～15nm 膠體金均可用作電鏡水平的標記物。3～15nm 的膠體金多用于單一抗原顆粒的檢測，而直徑15nm 多用于檢測量較多的感染細胞。

膠體金用于電鏡水平的研究，主要包括：①細胞懸液或單層培養(yǎng)中細胞表面抗原的觀察。②單層培養(yǎng)中細胞內(nèi)抗原的檢測。③組織抗原的檢測。金標記在電鏡水平的應用，主要方法包括：包埋前染色、包埋后染色、免疫負染色、雙標記技術和原位雜交技術等。實驗證明，該法樣本用量少、檢測速度快、對比明顯、操作簡單、敏感性和特異性高，既可用于抗原檢測，也可用于抗體檢測，因此，可同時適用于科研和診斷。

２、膠體金在光鏡水平的應用。膠體金同樣可用做光鏡水平的標記物，取代傳統(tǒng)的熒光素、酶等。各種細胞涂片、切片均可應用。主要用于：①用單克窿抗體或抗血清檢測細胞懸液或培養(yǎng)的單層細胞的膜表面抗原。②檢測培養(yǎng)的單層細胞胞內(nèi)抗原，③組織中或亞薄切片中抗原的檢測。 膠體金用于光鏡水平的研究，可以彌補其它標記物不可避免的本底過高和內(nèi)部酶活性干擾等缺點。

３、膠體金在流式細胞儀中的應用。應用熒光素標記的抗體，通過流式細胞儀計數(shù)分析細胞表面抗原，是免疫學研究中的重要技術之一。但由于不同熒光素的光譜相互重疊，區(qū)分不同的標記困難，因此必須尋找一種非熒光素標記物，用于流式細胞計數(shù)。這樣可以同時進行幾種標記。該標記物必須能夠改變散射角，膠體金可以明顯地改變紅激光散射角，因而可以作為流式細胞儀的標記物之一。

４、凝集試驗：單分散的免疫金溶膠呈清澈透明的溶液，其顏色隨溶膠顆粒大小而變化，當與相應抗原或抗體發(fā)生專一性反應后出現(xiàn)凝聚，溶膠顆粒極度增大，光散射隨之發(fā)生變化，顆粒也會沉降，溶液的顏色變淡甚至變成無色，這一原理可定性或定量地應用于免疫反應。

５、免疫印跡技術(immunoblotting)：免疫印跡是一種較新的免疫化學技術。用聚丙烯酰胺凝膠電泳將蛋白質(zhì)分離，得到的區(qū)帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，然后用酶免疫法（或免疫熒光、ＲＩＡ）進行定量。免疫膠體金也可用于該法的定量。轉(zhuǎn)移后的硝酸纖維素膜與某特異性的抗體保溫后，再與經(jīng)葡萄球菌Ａ蛋白致敏的膠體金溫育，徹底洗去多余的膠體金，根據(jù)膜上膠體金顆粒顏色深淺可測知樣品中的特異性抗原。

６、膠體金在肉眼水平的應用。膠體金取代傳統(tǒng)三大標記物，用于肉眼水平的免疫檢測中。除了膠體金本身具有的特點外，還有以下優(yōu)點：①試劑和樣本用量極小，樣本量可低至1～2ul；②不需γ－計數(shù)器、熒光顯微鏡、酶標檢測儀等貴重儀器，更適于現(xiàn)場應用； ③沒有諸如放射性同位素、鄰苯二胺等有害物質(zhì)參與；④實驗結(jié)果可以長期保存；⑤時間大大縮短，提高了檢測速度。金標過程中，無共價鍵形成，是一定離子濃度下的物理吸附。因此幾乎所有的大分子物質(zhì)都可被金標記，標記后大分子物質(zhì)活性不發(fā)生改變。實驗結(jié)果表明，膠體金的敏感性可達到 ELISA的水平。而結(jié)合銀染色時，檢測的敏感性更大大提高。

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